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XTerra色譜柱的前處理和操作使用

更新時間:2024-09-12      點擊次數(shù):210

XTerra色譜柱的前處理和操作使用

為確保XTerra™色譜柱具有最佳的性能,請遵守以下操作指導(dǎo):

 

a.保護(hù)柱

  在進(jìn)樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)和顆粒大小都適合的保護(hù)柱對于保護(hù)分析柱至關(guān)重要。請選擇高性能的保護(hù)柱以便在保護(hù)分析柱的同時不會影響到分離效果。

保護(hù)柱需要定期更換,更換的周期主要取決于樣品的干凈程度。當(dāng)系統(tǒng)壓力上升至超過某個設(shè)定值或者突然出現(xiàn)色譜峰分叉的現(xiàn)象,往往是需要更換保護(hù)柱的信號。

 

b.樣品前處理

1. 樣品中的雜質(zhì)通常會污染色譜柱,建議采用合適的SPE技術(shù)(OasisSep-pak)凈化樣品來避免這個問題。

2.用流動相或比流動相洗脫強(qiáng)度弱的溶液(含有較少有機(jī)溶劑)溶解或稀釋樣品可以獲得最好的峰形和檢測靈敏度。

3.果樣品在流動相中不溶解或者溶解度很差時,要確保樣品、樣品溶液和流動相是互溶的,以避免樣品在流動相中析出。

4. 0.2μm的濾膜過濾樣品以充分去除顆粒雜質(zhì),如果樣品溶解在含有機(jī)溶劑的改性劑(如乙腈、甲醇)的溶劑中,在選擇濾膜時要注意膜的材質(zhì)不會在該溶劑中溶解,也可以在8000rpm轉(zhuǎn)速的條件下離心20分鐘后移取上清液進(jìn)樣。

 

c.pH使用范圍

  XTerra™色譜柱的建議pH使用范圍比硅膠基體色譜柱的寬,XTerraMS色譜柱的pH使用范圍是1-12XTerra RP色譜柱的pH使用范圍是2-11。值得指出的是:色譜柱的壽命取決于所用緩沖液的種類、濃度和溫度。

  以下的表格2,34列出了建議使用的不同pH的緩沖溶液體系,可以作為開發(fā)LC方法的參考。請注意在高溫條件下使用磷酸鹽緩沖體系會對柱壽命有很大的影響,盡管XTerra色譜柱比硅膠基體色譜柱具有更長的壽命。

2:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH1-7)

image.png

3:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH 7-12)

image.png

4:XTerra™色譜柱建議使用的緩沖溶液體系(pH9-12)

image.png

 

d.溶劑

  為了使色譜柱的性能達(dá)到最好,建議使用高品質(zhì)的色譜溶劑。所有水相流動相在使用前都必須經(jīng)過0.2μm濾膜過濾,建議使用Gelman Acrodisc過濾器。含有懸浮顆粒的溶劑通常會堵塞色譜柱入口濾片,這將導(dǎo)致柱壓升高,分離度變差。

  溶劑使用前需要充分脫氣,這可以避免在泵和檢測器內(nèi)出現(xiàn)氣泡,同時建議使用在線脫氣裝置,由于在運(yùn)行低壓梯度時水相和有機(jī)溶劑混合會產(chǎn)生氣泡,因此充分脫氣尤為重要。

 

e.壓力

  所有XTerra™色譜柱能夠耐受6000psi(400bar)的壓力,為了獲得更長的使用壽命,我們還是建議色譜柱盡可能在低于4000~5000psi壓力下使用。

 

f.溫度

  XTerra™色譜柱的建議使用溫度是20-60℃,高溫可以提高分離選擇性、降低流動相粘度并同時提高傳質(zhì)速率。然而,超過室溫使用色譜柱對柱壽命有都負(fù)面影響,其影響程度取決于流動相pH和所使用的緩沖體系。

 

g.等度分離方法的轉(zhuǎn)移

  請根據(jù)如下公式計算不同規(guī)格的色譜柱相應(yīng)的體積流速(保持流動相的線速度不變)、上樣量和上樣體積:

如果色譜柱內(nèi)徑和長度改變:

F2=F1×(r2/r1)

上樣量2=上樣量1X(r2/r1)×(L2/L1)

上樣體積2=上樣體積1X(r2/r1)2×(L2/L1)

其中,r代表色譜柱內(nèi)徑

F代表體積流速

L代表柱長

1代表初始色譜柱

2代表目標(biāo)色譜柱


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